尿激酶活性測(cè)定
比活測(cè)定
(1) 試劑 牛纖維蛋白員溶液 取牛纖維蛋白員,加巴比妥一氯化鈉緩沖液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.67mg可凝結(jié)蛋白的溶液。
牛凝血mei溶液 取牛凝血mei,加巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)制成每1ml 中含6.0 單位的溶液。
牛纖維蛋白溶酶原溶液 取牛纖維蛋白溶液酶原,加三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH9.0 )制成每1ml 中含1 ~1.4 酪蛋白單位的溶液(如溶液渾濁,離心,取上清液備用)。
混合溶液 臨用前取等容積的牛凝血mei溶液和牛纖維蛋白溶酶原溶液,混勻。
(2) 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品,加巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)制成每1ml 中含60單位的溶液。
(3) 供試品溶液的制備 取本品適量,用巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH 7.8)溶解、混勻,并稀釋成與標(biāo)準(zhǔn)品溶液相同的濃度。
(4) 測(cè)定法 取試管4 支,各加牛纖維蛋白員溶液0.3ml ,置37℃±0.5℃水浴中,分別加入巴比妥-氯化鈉緩沖液(pH7.8)0.9ml、0.8ml、0.7ml、0.6ml,依次加標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml,再分別加混合溶液0.4ml ,立即搖勻,分別計(jì)時(shí)。反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)在30~40秒內(nèi)凝結(jié),當(dāng)凝塊內(nèi)小氣泡上升到反應(yīng)系統(tǒng)體積一半時(shí)作為反應(yīng)終點(diǎn),記時(shí)。以尿激酶的濃度為橫座標(biāo),以反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)間與入水浴時(shí)間的差值為縱座標(biāo),在雙對(duì)數(shù)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,應(yīng)呈直線。供試品按上法測(cè)定,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得效價(jià)(單位)。標(biāo)準(zhǔn)品和供試品各作二次,所得的直線亦應(yīng)平行,否則應(yīng)重復(fù)試驗(yàn)。
蛋白質(zhì)含量 取本品約10mg,精密稱定,照氮測(cè)定法(附錄Ⅶ D第二法)測(cè)定,將結(jié)果乘以6.25,即得供試品中蛋白含量,并計(jì)算每1mg供試品中的蛋白量(mg)。
比活 按下式計(jì)算比活。
每1mg供試品的效價(jià)(單位)
比活=──────────────
每1mg供試品中蛋白量(mg)
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